康润生物

说起反转录，小编相信当大家提取出高质量的RNA时，肯定开心的手舞足蹈，满心欢喜想着接下来的实验轻轻松松搞定！这样想没错，但是如果你想在论文或者汇报中得到漂亮的数据，那反转录这一步也非常关键。所以今天小编给大家梳理了反转录实验过程中需要注意的几个要点，希望大家在实验过程中多多留意，获得漂亮的数据。

一、选择最佳的反转录引物

反转录引物一般分为三类：oligo dT、随机引物、基因特异性引物。oligo dT，可识别具有poly(A)尾的真核mRNA，从而获得真核生物mRNA全长。随机引物，可以结合到样本中的任何类型RNA，但并不能获得整个基因全长的cDNA。基因特异性引物，是根据实验者的特定需求设计出来的，适用于目的序列已知的情况，产生所需的cDNA。

二、考虑RNA的二级结构

若要获取全长RNA的反转录，那么我们就需要考虑RNA内部是否含有二级结构，因为反转录酶在遇到二级结构时会终止反应或从模板上脱落下来。通常GC含量高的基因意味着RNA很难被变性且不可能是单链。高效且热稳定性强的反转录酶，可有效克服高GC、低丰度模板的反转录难题。

三、去除基因组DNA

污染性基因组DNA(gDNA)可能会干扰RNA反转录，并导致后续PCR或qPCR实验结果出现假阳性、高背景或检测率低等情况。通常在RNA提取过程中加入合适浓度的DNase I，37℃加热10-15min，去除干扰基因组DNA。另外，如果是做qPCR实验，更简单的方法则是选用含有去除基因组DNA的试剂盒。

四、选择合适的反转录方法

RT-PCR和RT-qPCR有两种选择：一步法和两步法。一步法，反转录和（q）PCR扩增是在同一个反应管中进行。两步法，反转录与（q）PCR扩增反应单独进行。两种方法各有优缺点。

注意事项这么多，您需要一套可全面应对上述问题的高性能产品！

GenStar新一代StarScript III M-MLv反转录酶，拥有卓越的cDNA合成能力，全面提升合成产量、提高热稳定性，克服了低丰度、复杂模板难题！

产品特点

·热稳定性
可耐受37-65℃反应温度，适合高GC复杂模板的反转录反应。

·兼容性强
适用于不同物种、各种类型的RNA模板。

·灵敏度高
针对各种RNA模板，克服低丰度、复杂模板难题。

·产品全面
根据不同的实验应用场景，可选择含去基因组试剂、预混试剂或试剂盒。

·应用广泛
可应用于基因全长cDNA合成、qPCR等实验。